Perché si usa?
Rappaport Vassiliadis Broth (Fig. 1) è un terreno liquido selettivo per Salmonella in matrici come carni e latticini, feci e acque contaminate.
Il nome deriva dal fatto che Rappaport et al. hanno allestito un terreno di arricchimento per Salmonella, poi modificato da Vassiliadis et al.
La prima versione sviluppata da Rappaport richiedeva un’incubazione a 37°C, mentre quella modificata da Vassiliadis aveva un ridotto tenore di verde malachite e richiedeva temperatura di incubazione di 43°C.
Il terreno, utilizzato in ambito clinico, risulta essere selettivo per Salmonella diversa dalla S. thyhi nei campioni fecali umani.
Rappaport Vassiliadis Soy Broth.
[Fonte: labolytic.no]
Come si usa?
E’ necessario stemperare in 10 mL di brodo, con ansa sterile, 50-100 microlitri di feci liquide. Il brodo va successivamente incubato a 41,5°C per 18-24 h.
Composizione terreno
Il terreno risulta essere costituito dai seguenti reagenti (Tabella 1):
Tabella 1
Reagenti utilizzati per sviluppare il brodo
[Fonte: BD istruzioni per l’uso]
I reagenti presentano una formula per litro di acqua purificata, e il brodo ha pH di 5,1. La formulazione può essere compensata o corretta a seconda dei criteri di rendimento.
Il brodo è arricchito con carbonio e azoto, il cloruro di magnesio, che alza la pressione osmotica, e il verde di malachite sono selettivi per le Salmonella spp.
Le fiale devono essere conservate al buio a 2-8°C, fino alla data di scadenza, e utilizzate appena aperte.
Risultati della crescita
L’avvenuta crescita microbica è segnalata dalla comparsa di torbidità e dall’aspetto lattiginoso che assume il brodo (Fig.2). Poichè un brodo limpido non sempre è reale sinonimo di assenza di crescita, è utile fare un subcultura del campione su terreni solidi come il Brilliant Green Agar o il MacConkey II Agar.
Le colonie sviluppatesi sul terreno solido devono poi essere ulteriormente identificate tramite test biochimici o sierologici.
Figura 2
Aspetto del brodo senza (sinistra) e con sviluppo microbico (destra).
[Fonte: kisambio.com]
Limitazioni
Come detto in precedenza, l’assenza di torbidità non significa sempre assenza di crescita microbica.