Principio
L'esculina è un glucoside estraibile dell'Aesculus hippocastanum, dall'Aesculus californica e dalla Daphne mezereum.
L'idrolisi dell'esculina è stata descritta per la prima volta da Rochaix nel 1924, per poi essere sfruttata nella formulazione del terreno di coltura "Bile-Esculina" da Swan nel 1954.
Si tratta di un terreno selettivo e differenziale (Figura 1) per l'isolamento e l'identificazione dei membri del genere Enterococcus. L'abilità di idrolizzare l'esculina in presenza di bile, infatti, è una caratteristica peculiare degli enterococchi e degli streptococchi di gruppo D.
Preparazione e composizione
Gli ingredienti per preparare il terreno di coltura sono riportati in Tabella 1:
| Reagenti | Dosi (g/l) |
| Digerito di tessuto animale | 5,0 |
| Estratto di manzo | 3,0 |
| Esculina | 1,0 |
| Sali biliari | 40,0 |
| Citrato ferrico | 0,5 |
| Agar | 15,0 |
Il pH finale del mezzo deve essere di 6,6 +/- 0,2 a 25°C.
Per la preparazione è necessario sospendere 64,5 g in 1000 ml di acqua distillata.
Il tutto va portato all'ebollizione fino al completo scioglimento delle polveri.
Il terreno va successivamente sterilizzato in autoclave per 15' a 121°C, dopodiché può essere colato in piastre Petri o in tubi da microbiologia (con inclinazione) in cui potrà solidificare.
Risultati e interpretazione
Il terreno BEA seminato va poi incubato a 35°C per 24-48 h in aerobiosi. L'idrolisi dell'esculina in presenza di bile produce un precipitato che rende nero/marrone il mezzo (Figura 2), altrimenti giallino.
Controllo qualità
Per il controllo qualità del BEA è necessario seguire le indicazioni riportate in Tabella 2:
| Microrganismo | Crescita |
| Enterococcus faecalis | Lussureggiante, idrolisi esculina e colorazione nera intorno alle colonie |
| Escherichia coli | Buona crescita, assenza di colorazione nera intorno alle colonie |
| Enterococcus faecium | Lussureggiante, idrolisi esculina e colorazione nera intorno alle colonie |
| Yersinia enterocolitica | Lussureggiante, idrolisi esculina e colorazione nera intorno alle colonie |
| Streptoccocus pyogenes | Crescita assente/scarsa, no colorazione nera intorno alle colonie |
Fonti
- Bile Esculin Test- Principle, procedure, results, uses, limitations (Microbe Notes);
- Bile esculin agar. M1225. HiMedia Laboratories.
- Biochemical Tests for the Identification of Aerobic Bacteria. (2016). Clinical Microbiology Procedures Handbook, 3.17.1.1 3.17.48.3.DOI:10.1128/9781555818814.ch3.17.1
Crediti immagini
- Figura 1: Microbe Notes;
- Figura 2: anaerobsystems.com.